关于急性白血病治疗反应评估中原始细胞百分比的报告：欧洲血液学会 (EHA) / 欧洲白血病网 (ELN) 专家小组的建议（二）

①建议采用经验证过的 MRD 检测方法替代形态学，作为评估骨髓缓解的金标准 （MRD 检测方法的灵敏度需至少达到 0.01%，如流式细胞学、qPCR 或 NGS 定量检测 IG/TCR）。

②分子 MRD 检测无法评估骨髓样本是否存在血液稀释。若骨髓涂片与 MRD 样本为同一样本（首次抽取），则可通过细胞形态学评估 MRD 样本的合格性。

③若形态学识别的原始细胞计数与 MRD 结果间出现显著差异，可能和 MRD 检测的靶点丢失相关。

①建议采用经验证的灵敏度最少能够达到 0.1% 的 MRD 检测方法（流式细胞学、qPCR 或 NGS）。

②若经适宜的 MRD 检测或其他针对 AML / 高危MDS 相关细胞遗传学检测结果为阴性，即使形态学原始细胞计数≥5%，也不能判定为疾病持续存在或复发；

③对于急性巨核细胞白血病（AMKL）、红系白血病 [急性红系白血病（AEL）/ 纯红系白血病（PEL）] 和急性单核细胞白血病（AMOL）等亚型，建议采用细胞形态学计数结果报告原始细胞百分比。

①ALAL 反应评估中报告原始细胞百分比，通常需要采用更全面的流式细胞检测方案，评估所有相关谱系。

②对于 AUL 或单群原始细胞群（双表型）的 MPAL，只要包含必要的标志物；而双系 MPAL 中，通常需要同时使用 AML 和 ALL MRD panel 进行评估。

③可通过基于 RNA 或 DNA 的 PCR 检测伴有基因重排的 MPAL 患者。

以下总结了 ALL /AML 缓解评估中获取准确原始细胞计数的关键注意事项及推荐的检测方法。

①用于计算流式细胞 MRD 百分比的分母细胞在不同研究中不尽相同（如有核细胞总数、非红系细胞或单个核细胞）。

 有核细胞总数作为分母时，能与细胞形态学原始细胞计数及多种分子检测方法能够保持一致。

 样本中若存在明显红系增生，以非红系细胞为分母计算的 MRD 百分比可能显著高于以有核细胞总数为分母的 MRD 值。

 不建议采用单个核细胞作为分母评估骨髓缓解情况。

②若有核红细胞的保存效果可能欠佳，需结合细胞形态学进行综合报告，以识别伴有红系增生病例。

③在靶向治疗后（如 B-ALL 的抗 CD19 治疗），应选择替代性靶标的主要设门策略识别白血病细胞。

①采用 qPCR 或 NGS 进行 IG/TCR MRD 检测，目前已被视为 ALL MRD 定量的分子学金标准。

②在 KMT2A 重排 ALL 中，IG/TCR 克隆性重排可能发生缺失或克隆演化，推荐通过 qPCR 检测 KMT2A 重排作为 MRD 标志物。

③在 Ph+ ALL 中，BCR::ABL1 转录本可能存在于不同谱系细胞中（包括成熟髓系细胞），因此，不可根据 BCR::ABL1 MRD 阳性结果报告 Ph+ ALL 患者白血病原始细胞百分比。

通过骨髓活检评估原始细胞可解决骨髓再生障碍、坏死或纤维化相关问题，但在检测的准确性和灵敏度方面，不及流式细胞学和 IG/TCR NGS 检测。

①AML 反应评估中，推荐采用流式细胞学 MRD 检测方法进行原始细胞计数。

②确定总髓系原始细胞最稳定的量化方法为：在排除技术性干扰、CD34 阳性 B 祖细胞及 CD117 阳性非原始细胞后，计算 CD45 / 侧向散射（SSC）“原始细胞区”（CD45 和 SSC 中低水平表达）内的 CD34 阳性和 / 或 CD117 阳性细胞。

③对于仅低表达 CD34 和/或 CD117 的 AML 原始细胞，HLA-DR 有时可作为主要未成熟标志物。

④对于表达 CD117 等未成熟标志物、但 SSC 较高且落在 CD45 / SSC 原始细胞门外的髓系细胞，若其免疫表型谱与正常髓系前体细胞存在差异，则应将其计为 AML 原始细胞。

①无法在RNA水平通过 RT-qPCR 检测基因融合或 NPM1 突变来推导原始细胞百分比。

②在患者接受分化治疗时，报告原始细胞应采用通过细胞形态学和流式细胞学确定的原始细胞，且排除分化的细胞。

③对于 APL，骨髓反应评估的关键时间点是巩固治疗结束时，且建议使用 RT-qPCR MRD 检测方法来评估分子缓解状态。